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裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)技巧有哪些?

更新時(shí)間:2022-09-08 00:00:00      點(diǎn)擊次數(shù):3842

裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室常用的是BALB/c-nu裸小鼠 ,隨著裸小鼠年齡增長或有關(guān)因素的影響(如病毒感染),裸鼠體內(nèi)正常T細(xì)胞會(huì)增加,故接種腫瘤實(shí)驗(yàn)一般采用4--6周齡的裸鼠。


裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)技巧
1、細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵,所以細(xì)胞生長狀態(tài)一定要好,取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜。收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
2、胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍,目的為去除細(xì)胞中殘余的血清。
3、用PBS或者無血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度,一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個(gè)細(xì)胞/支,接種體積為0.1-0.2ml,因此細(xì)胞懸液的濃度為1-5×10^7個(gè)細(xì)胞/ml,如若有條件的實(shí)驗(yàn)室,也可以加基質(zhì)膠以加速瘤塊的生成,基質(zhì)膠與PBS或無血清的比列為1:1。

4、細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下,一般盡量在半小時(shí)內(nèi)完成(如果接種量大,可以分批接種),途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝以保持細(xì)胞的活性。
5、選擇的裸鼠一般在4-6周齡,體重16-18g左右,種植部位選擇血供豐富區(qū)域,如腋窩中后部。

6、接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散,防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率,并且導(dǎo)致小鼠接種細(xì)胞數(shù)量的差異過大。

7、接種時(shí),針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn),約1cm深,針頭在皮下左右滑動(dòng)幾次,以便細(xì)胞接種成團(tuán),減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出。

8、如何保定裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚,小拇指夾住裸鼠尾巴。

9、接種后1-2周左右可以見到皮下開始出現(xiàn)腫塊。

10、根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量,一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤不宜生長過大,一般不要超過2000mm3。

11、腫瘤大小測量一般為1周兩次,游標(biāo)卡尺測量腫瘤最長和最短部位。V=1/2*a*b2 (a為長軸,b為短軸)。

12、皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA,一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等。

 

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