原代分離

簡(jiǎn)要描述：原代分離是指將生物體組織或器官或細(xì)胞，從體內(nèi)或體外分離出來(lái)，使其與生物體分離，進(jìn)而培養(yǎng)生長(zhǎng)，同時(shí)與生物體的變化無(wú)關(guān)。原代分離對(duì)于生物學(xué)的研究有著重要的意義，可以獲得大量的細(xì)胞或組織的原始文化，研究其生長(zhǎng)和分化、代謝、功能等方面的特性。

更新時(shí)間：2024-10-26 00:00:00
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原代分離是指將生物體組織或器官或細(xì)胞，從體內(nèi)或體外分離出來(lái)，使其與生物體分離，進(jìn)而培養(yǎng)生長(zhǎng)，同時(shí)與生物體的變化無(wú)關(guān)。原代分離對(duì)于生物學(xué)的研究有著重要的意義，可以獲得大量的細(xì)胞或組織的原始文化，研究其生長(zhǎng)和分化、代謝、功能等方面的特性。

一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡(jiǎn)單的方法是采用10000 min的低速離心10分鐘，若懸液量大，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間，但速度不能太高，延時(shí)也不能太長(zhǎng)，以避免擠壓或機(jī)械損傷細(xì)胞，離心沉淀用無(wú)鈣、鎂PBS洗兩次，用培養(yǎng)基洗- -次后，調(diào)整適當(dāng)細(xì)胞濃度后再分瓶培養(yǎng),若選用懸液中某些細(xì)胞，常采用離心后的細(xì)胞分層液，因?yàn)?，?jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。不同比重的分層液的配制和具體分離方法詳見(jiàn)淋巴細(xì)胞分離培養(yǎng)的章節(jié)。

二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。
(一)機(jī)械分散法
所取材料若纖維成分很少，如腦組織，部分胚胎組織可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散組織細(xì)胞或?qū)⒁殉浞旨羲榉稚⒌慕M織放在注射器內(nèi)(用九號(hào)針) ,使細(xì)胞通過(guò)針頭壓出，或在不銹鋼紗網(wǎng)內(nèi)用鈍物壓擠(常用注射器鈍端)使細(xì)胞從網(wǎng)孔中壓擠出。此法分離細(xì)胞雖然簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差。此法僅適用于處理纖維成分少的軟組織。
(二)消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松,由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后,細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

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